要选择合适的Transwell小室孔径，首先要明确构建出的3D细胞培养模型是否涉及到细胞穿膜。一般来说，共培养试验及构建细胞极化模型等不需要细胞穿膜，大多选择0.4μm或1.0μm的小孔径产品。而像是细胞迁移及侵袭这类实验，则需要选择较大孔径的产品。

下表为常见应用和细胞种类的产品推荐孔径，仅供参考，对于一些要求严格的实验，预实验就必不可少啦~

Corning品牌Transwell小室有聚碳酸酯（PC），聚酯（PET）以及聚四氟乙烯（PTFE）三种膜材质。

PC和PET膜材质应用都很广泛，二者的主要区别在光透性方面。PC膜为半透明，不太方便在培养的过程中观察上室细胞的形态；PET膜透明，方便在相差显微镜下观察细胞的状态。

另外，在0.4um孔径下，PC膜和PET膜的孔密度（单位面积上的孔数量）不同，PC膜提供更高的膜孔密度。

您可根据对实验的要求（是否需要观察细胞状态，是否需要更高孔密度的膜）来选择。

与PC、PET膜相比，PTFE膜是使用较少的一种材质。PTFE膜的Transwell-COL小室包被有等摩尔数混合的I型和III型牛胎盘胶原，可以促进细胞的贴附和伸展，容许细胞在培养状态下（湿润后）观察。

此外，PC、PET膜上的孔均为蚀刻的小孔，有着额定的孔密度，在镜下可以观察到。而PTFE膜上的孔为拉伸形成，在三类膜中只有胶原包被的PTFE膜没有确定的孔密度，因为PTFE膜为拉伸形成，是具有曲折孔道的膜。

未包被的小室膜材质（PC或PET）虽与普通塑料细胞培养皿/瓶的材质（PS）不同，但膜的两侧均经过组织培养表面处理（ TissueCulture Treated, TC Treated），与一般做细胞培养的PS耗材的表面处理相同。因此，在正常情况下，细胞在小室内的贴壁情况应与培养皿/瓶中类似。在普通培养时需包被基质蛋白等辅助贴壁的细胞，在小室上仍然需要包被。包被方法类似普通培养表面，可通过小室膜表面积换算所需包被液的量，具体可见康宁相关操作说明示例。

除了Collagen包被的PTFE小室，康宁同时提供多种预包被基质蛋白的PET膜小室产品，详情请见目录。

一般先将预热的培养基加入多孔板的孔中（下室），再轻轻将小室放入孔中。在放入时，建议将小室稍稍倾斜，一侧先接触液面，以免垂直放入在小室下生成气泡。之后便可将混合均匀的细胞悬液加入小室内部。

小室的上下室加液后液面基本相平，以下为推荐加液体积